आण्विक जीवविज्ञान ग्रेड प्रोटीनेज के पाउडर N9017 1g

प्रोटीनेज के पाउडर

आण्विक जीवविज्ञान ग्रेड, केवल अनुसंधान उपयोग के लिए

बिल्ली संख्या N9017

आकार: 1 ग्राम

विशिष्ट गतिविधि: ≥30 यू/मिलीग्राम प्रोटीन

प्रपत्र: इसमें प्रोटीनेज़ K (≥95%), लियोफ़िलाइज़्ड पाउडर होता है

अवयव

भंडारण

-20ºC अनुशंसित।प्रोटीनेज़ के लियोफिलाइज्ड पाउडर की शेल्फ लाइफ तीन साल है जब इसे 4ºC से नीचे सीलबंद और सूखा रखा जाता है।प्रोटीनेज के लियोफिलाइज्ड पाउडर को कमरे के तापमान पर भेजा जाता है।

विवरण

प्रोटीनेज़ K एक एंडोलिटिक प्रोटीज़ है जो एलिफैटिक, एरोमैटिक या हाइड्रोफोबिक अमीनो एसिड के कार्बोक्जिलिक पक्षों पर पेप्टाइड बॉन्ड को तोड़ता है।प्रोटीनेज़ K को सेरीन प्रोटीज़ के रूप में वर्गीकृत किया गया है।इस एंजाइम द्वारा हाइड्रोलाइज किया जाने वाला सबसे छोटा पेप्टाइड टेट्रापेप्टाइड है।

विशेषताएँ

• पुनः संयोजक प्रोटीनेज़ K

• प्रतिक्रिया उत्पादों की एक विस्तृत श्रृंखला में सक्रिय

अनुप्रयोग

• संवर्धित कोशिकाओं और ऊतकों से जीनोमिक डीएनए का अलगाव

• डीएनए और आरएनए को ऊतकों या कोशिका रेखाओं से अलग करते समय डीएनएसेस और आरनेसेस को हटाना

• एंजाइम स्थानीयकरण का निर्धारण

• पीसीआर उत्पादों की क्लोनिंग दक्षता में सुधार

गुणवत्ता नियंत्रण

DNase गतिविधि:37ºC पर λ डीएनए के साथ 6 घंटे ऊष्मायन के बाद कोई भी पता लगाने योग्य एंजाइम गतिविधि नहीं।

RNase गतिविधि:25ºC पर आरएनए के साथ 16 घंटे ऊष्मायन के बाद कोई भी पता लगाने योग्य राइबोन्यूक्लिज़ गतिविधि नहीं।

स्रोत

क्लोन जीन एन्कोडिंग वाली यीस्ट कोशिकाओं से आनुवंशिक रूप से इंजीनियर एंग्योडोंटियम एल्बम (ट्रिटिराचियम एल्बम) एंडोलिटिक प्रोटीज़।

आणविक वजन

29.3 केडीए मोनोमर।

गतिविधि इकाई की परिभाषा

एंजाइम की एक इकाई सब्सट्रेट के रूप में विकृत हीमोग्लोबिन का उपयोग करके 37 डिग्री सेल्सियस, पीएच 7.5 पर 1 मिनट में 1 μmol टायरोसिन के अनुरूप फोलिन-पॉजिटिव अमीनो एसिड और पेप्टाइड्स को मुक्त करती है।

निम्नलिखित मिश्रण में एंजाइम गतिविधि का परीक्षण किया जाता है: 0.08 एम पोटेशियम फॉस्फेट (पीएच 7.5), 5 एम यूरिया, 4 मिमी NaCl, 3 मिमी CaCl₂और 16.7 मिलीग्राम/एमएल हीमोग्लोबिन।

तैयारी निर्देश

स्टॉक घोल को तनुकरण बफर में 40-80 मिलीग्राम/मिलीलीटर के रूप में तैयार किया जा सकता है [20 मिमी ट्रिस-एचसीएल (पीएच 7.4), 1 मिमी CaCl₂] या [20 एमएम ट्रिस-एचसीएल (पीएच 7.4), 1 एमएम सीएसीएल_2,2% ग्लिसरॉल], 0.22μm फ़िल्टर का उपयोग करके निष्फल किया जाता है और 50% ग्लिसरॉल में 20-40mg/ml की अंतिम सांद्रता पर आपूर्ति की जाती है।24ºC से -80ºC तक विस्तृत तापमान रेंज में एलिकोट्स में स्टोर करें।

बाँझ निस्पंदन में कम प्रोटीन बाइंडिंग वाले पीईएस और पीवीडीएफ झिल्ली की सिफारिश की जाती है।

निषेध और निष्क्रियता

अवरोधक: प्रोटीनेज़ K को मेटल चेलेटर्स, थियोल-रिएक्टिव अभिकर्मकों या विशिष्ट ट्रिप्सिन और काइमोट्रिप्सिन अवरोधकों द्वारा निष्क्रिय नहीं किया जाता है।फेनिलमिथाइलसल्फोनील फ्लोराइड और डायसोप्रोपाइल फॉस्फोरोफ्लोराइडेट एंजाइम को पूरी तरह से रोकते हैं।

10 मिनट के लिए 95°C पर गर्म करके निष्क्रिय किया गया।

टिप्पणी

• 50-55°C पर इष्टतम गतिविधि।

• 65°C से ऊपर के तापमान पर एंजाइम का तेजी से विकृतीकरण होता है।

• प्रोटीनेज़ K के लिए अनुशंसित कार्यशील सांद्रता 0.05-1 mg/ml है।एंजाइम की गतिविधि 0.2-1% एसडीएस या 1-4 एम यूरिया द्वारा उत्तेजित होती है।

• सीए²⁺प्रोटीनेज़ K को ऑटोलिसिस से बचाता है, थर्मल स्थिरता बढ़ाता है और प्रोटीनेज़ K के सब्सट्रेट बाइंडिंग साइट के लिए एक नियामक कार्य करता है।

• विस्तृत पीएच रेंज में स्थिर: 4.0-12.5, इष्टतम पीएच 7.5-8.0।

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